威尼·至尊国际(中国)

1. WGBS（全基因组甲基化）

• 1.1 植物样本

  a. 植物组织样本送样量不低于0.2g
  采集样品时建议采用易提取、核酸含量高的植株幼嫩叶片，离体后迅速进行生理盐水漂洗，用无尘纸擦干表面水分，冰上分割50-100mg每个小块，液氮速冻，-80℃保存，不要使用RNAlatter、TRIzol、酒精保存。明确标识、安全密封、干冰运输
  b. 根、茎、叶、果实等组织较大时，建议切段或切碎送样
  c. 样品数目较多或送样量较多时，建议分袋、分管送样，便于取样
  d. 锡箔纸送样时，折叠要有可寻的纹理，避免提取样品时样品散落，样品信息标注于可视位置
  e. 如果客户同时做其它RNA组学，如果样本量相对充足，不建议采用共提取，建议将组织可以分管进行

• 1.2 动物样本

  常规样本
  a. 动物组织样本送样量不低于0.1g
  b. 选用新鲜的样本，离体后迅速进行生理盐水漂洗，剔除结缔组织等非研究组织，用无尘纸擦干表面水分，冰上分割50-100mg每个小块，液氮速冻，-80℃保存，不要使用RNAlatter、TRIzol、酒精保存。明确标识、安全密封、干冰运输
  c. 送样时将样品分为小块，有备份时分管送样
  d. 送样前，样品实行相应处理，如去皮、去毛等，软骨样品尽量切碎后送样
  e. 个体较小样品（蚊、螨等），一次提取的样品放在一个EP管中，避免分管寄送
  f. 禁止寄送带有人畜共患病的动物组织，包括但不限于病毒、细菌、寄生虫（如口蹄疫病毒、禽流感病毒、疟原虫、弓形虫等）
  g. 在动物组织样本中，若老师主要研究的是某一器官的甲基化水平，最好针对该器官进行取样，注意选取处理组和对照组样本
  h. 如果客户同时做其它RNA组学，如果样本量相对充足，不建议采用共提取，建议将组织可以分管进行
  【注】需用新鲜组织或取自新鲜组织的 DNA，石蜡包埋、甲醛固定、乙醇、乙酸处理过的样品建议不要做 WGBS
  血液样本
  a. 哺乳类动物血液不低于2ml
  b. 红细胞有核类动物血液不低1ml
  c. 保存到EDTA管中，液氮速冻，-80℃保存，不要使用RNAlatter、TRIzol、酒精保存
  d. cfDNA因其自身长度特点，经过亚硫酸盐的处理后，长度会进一步降低，某些指标相对常规 DNA 样本较弱。例如 Duplication 和比对率等，因此此样本只能进行风险建库
  【注】由于血液样本不具有组织特异性的特点，在针对某些特异疾病或癌症的研究时，相较于组织样本来说，可能筛选到的差异DMR较少，特异性差，研究针对性弱。若老师选择血液样本进行甲基化研究，患者及健康人样本均需要选取血液样本，不建议将其与组织样本进行对照研究
  细胞样本
  a.细胞样本不低于>1*10⁶个
  b.低温离心悬浮细胞（贴壁细胞需要客户先消化处理），用PBS缓冲液将细胞快速洗一次，然后离心沉淀，液氮速冻，-80℃保存，不要使用RNAlatter、TRIzol、酒精保存。明确标识、安全密封、干冰运输

• 1.3 核酸样本

  浓度	体积	总量
  >24ng/μl	20μl≤V≤120μl	>400ng

  因部分客户核酸含有杂质、颜色等物质导致会产生大量损失，为保证您的样本一次检测合格并节约宝贵的重送样时间，送样建议量是高于公司判定标准的，请您在核酸量足够的前提下尽量按照送样建议来送样，感谢您的大力支持与配合。

2. RRBS（简化甲基化）

• 2.1 动物样本

  常规样本
  a. 动物组织样本送样量不低于0.5g
  b. 选用新鲜的样本，离体后迅速进行生理盐水漂洗，剔除结缔组织等非研究组织，用无尘纸擦干表面水分，冰上分割50-100mg每个小块，液氮速冻，-80℃保存，不要使用RNAlatter、TRIzol、酒精保存。明确标识、安全密封、干冰运输
  c. 送样时将样品分为小块，有备份时分管送样
  d. 送样前，样品实行相应处理，如去皮、去毛等，软骨样品尽量切碎后送样
  e. 禁止寄送带有人畜共患病的动物组织，包括但不限于病毒、细菌、寄生虫（如口蹄疫病毒、禽流感病毒、疟原虫、弓形虫等）
  f. 在动物组织样本中，若老师主要研究的是某一器官的甲基化水平，最好针对该器官进行取样，注意选取处理组和对照组样本
  g. 如果客户同时做其它RNA组学，如果样本量相对充足，不建议采用共提取，建议将组织可以分管进行
  【注】需用新鲜组织或取自新鲜组织的DNA，石蜡包埋、甲醛固定、乙醇、乙酸处理过的样品建议不要做RRBS
  血液样本
  细胞样本 a. 哺乳类动物血液不低于 2ml
  b. 保存到 EDTA 管中，液氮速冻，-80℃保存，不要使用 RNAlatter 、TRIzol 、酒精保存 【注】 由于血液样本不具有组织特异性的特点，在针对某些特异疾病或癌症的研究时，相较于组织样本来说，可能筛选到的差异 DMR 较少，特异性差，研究针对性弱。 若老师选择血液样本进行甲基化研究，患者及健康人样本均需要选取血液样本 时，不建议将其与组织样本进行对照研究
  a. 细胞样本不低于>5*10⁸个
  b. 低温离心悬浮细胞（贴壁细胞需要客户先消化处理），用PBS缓冲液将细胞快速洗一次，然后离心沉淀，液氮速冻，-80℃保存，不要使用RNAlatter、TRIzol、酒精保存。明确标识、安全密封、干冰运输

• 2.2 核酸样本

  浓度	体积	总量
  >24ng/μl	20μl≤V≤120μl	>2000ng

  因部分客户核酸含有杂质、颜色等物质导致会产生大量损失，为保证您的样本一次检测合格并节约宝贵的重送样时间，送样建议量是高于公司判定标准的，请您在核酸量足够的前提下尽量按照送样建议来送样，感谢您的大力支持与配合。

3 样本打包及寄送建议

• 3.1 样本的打包

  （1）核酸样品建议使用质量好的1.5ml或2ml 低吸附EP管装载样品，并用封口膜封口。为了防止样品管破裂，或者污染和混乱，请不要使用诸如PCR管、0.5ml EP管、八联管、96孔板、深孔板等非标准管送样。非标准管不利于样品保存以及后续实验的进行。如有样品使用非标准管制备，还请在送样前自行转管处理。
  （2）组织样本建议根据送样量使用合适规格带螺纹帽的EP管、冻存管或者离心管装载组织样品，并用封口膜封口。
  （3）为防止样品管在运输过程中受到干冰挤压破裂，最好将样品管放到50ml离心管或其他支撑物中，并在支撑物里添加棉花或卫生纸缓冲。大量样品建议将EP管放置在冻存盒中，并在冻存盒外面包裹气泡垫。如使用锡箔纸、自封袋装载的样品，为防止运输中受挤压破损，建议将锡箔纸折叠整齐装在自封袋中，在样品包装外再用气泡垫包好并固定。
  （4）对于血液样品，建议采用5-10ml 塑料抗凝采血管装载，为了防止运输过程中采血管因挤压而损坏，需要将每支采血管管身均用气泡垫包好，然后放置到塑料或纸质包装盒中。
  （5）用乙醇沉淀的样品由于运输中会有少量乙醇挥发出，建议将样品管盖用封口膜缠绕4-5圈。
  （6）为便于处理和保存，组织样品送样量请不要超过建议送样量的5倍（特殊的得率较低的样品除外）。

• 3.2 样本的名称标识

  （1）所有的样品必须具有清晰的标记，并且简洁明了。
  （2）使用锡箔纸包装的组织样品建议在锡箔纸内外均标记样品名称，并将锡箔纸放在自封袋中，自封袋外面再标记上样品名称，防止锡箔纸上样品名称模糊引起样品混乱。
  （3）使用乙醇沉淀的核酸样品，由于挥发出的乙醇会使记号笔的标记模糊，建议用油性记号笔将样品名称写在标签纸上，然后用透明胶带将标签纸粘贴在样品管壁上，并缠绕2-3圈。
  （4）样品名称建议使用“字母+数字”命名方式标注在管盖。其他信息如日期、浓度、物种等可标注在管壁。所有标注内容需与《样品信息单》保持一致。