RRBS-威尼·至尊国际(中国)-简化甲基化测序

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    表观组测序

    RRBS—经济且准确的DNA甲基化

    • 简化甲基化测序(Reduced Representation Bisulfite Sequencing,RRBS)顺利获得酶切富集启动子及 CpG 岛区域,并进行 Bisulfite 测序,同时 实现 DNA 甲基化状态检测的高分辨率和测序数据的高利用率。作为一种高性价比的甲基化研究方法,简化甲基化测序在大规模 临床样本的研究中具有广泛的应用前景。
    • 准确:

      单碱基分辨率,准确分析每一个胞嘧啶的甲基化状态。
    • 经济:

      性价比高,在较少的测序数据量下,针对启动子及 CpG 岛区域的DNA甲基化进行分析。

    应用方向

    队列研究 疾病与风险因素、遗传特征、生物标记物等研究。
    癌症疾病 肿瘤、精神疾病、代谢病、免疫病等研究。
    动物发育 肌肉发育、育种与繁殖等研究。

    诺禾优势

    • 1. 生信分析内容丰富 诺禾RRBS基于文章中高频出现的分析内容,搭建DNA甲基化与转录组关联分析。
    • 2. 周期快、质量好,稳定性高 诺禾采用先进的高通量测序平台,并与高性能计算平台(High Performance Computing,HPC)结合,实现 快速、稳定的测序数据分析及交付。
      • PE150

        测序读长
      • ≥80%

        测序质量Q30
      • 20,280

        物理核数
      • 1,727T flops

        项目经验
      • 400TB

        总内存
      • 58.6PB

        总储存
    • 3. 方案设计专业,质控严格 诺禾RRBS建库加入阴性对照λDNA,要求重亚硫酸盐转化效率99%以上,并采用主流软件bismark 进行分析... 从材料 选取,建库测序,到数据分析,每一步都经过科学、缜密的设计,以保障高质量研究成果。

      材料选取

      DNA样品

      文库构建
      甲基化文库

      PE150测序

      信息分析

    • 4. 项目文章以及物种经验丰富 威尼·至尊国际(中国)已经成功完成对猪,牛,羊,人,大鼠,小鼠等物种进行简化甲基化测序分析,助力客户在Journal of Agricultural and Food Chemistry等权威杂志发表多篇高水平文章。

    信息分析

    威尼·至尊国际(中国)RRBS实现单碱基分辨率的甲基化位点准确 定位,快速准确找到差异位点,实现高效分析DMR及相关基因的功能分析。
    分析内容 解决问题
    测序数据质量评估 过滤低质量数据,保证数据质量
    与参考基因组比对 比对率和覆盖度分析
    甲基化位点calling 分析甲基化位点
    甲基化分布 甲基化在基因组,染色体,功能与元件上的分布
    差异甲基化分析 寻找 DMR
    相关基因分析 相关基因GO,KEGG 富集分析
    多样本分析 PCA 分析多样本甲基化变化规律

    关联分析

    顺利获得DNA甲基化与基因表达进行关联分析,可以帮助我们分析DNA甲基化修饰与RNA表达是否存在相关性,样本中的哪些基因的表达受到DNA甲基化修饰的影响以及对应的基因的功能。因此RRBS和转录组的联合分析广泛应用于疾病研究,生物性状等多种领域。 基于多组学文章中的应用场景和经验,威尼·至尊国际(中国)搭建了内容丰富的甲基化与转录组关联分析流程,以助力科研者们发表高分文章。
    DNA甲基化与RNA-seq关联分析 1. 整体上的关联,主要从染色体层面基因甲基化水平与表达水平分布,基因上下游层面甲基化水平与表达水平分布两个方面来展示DNA甲基化修饰与基因表达的关系
    2. DMR相关基因表达与甲基化修饰,以甲基化分析得到的DMR相关基因为主体,以不同形式展示其表达与甲基化修饰的关系
    3. DMR相关基因与差异基因联合分析,将DMR相关基因与转录组分析得到的差异基因取交集,以不同的形式展示交集基因的甲基化水平和表达量及其注释信息
    4. DMR相关基因与差异基因功能分析,主要是基于基因集合间求交集并进行GO和KEGG富集分析

    送样建议

    样本类型 送样建议
    新鲜动物组织 >500 mg
    新鲜培养细胞数量 5×108个
    全血 >2 mL

    常见问题

    • 1.为什么RRBS数据分析中样本的CG含量较低?

        由于样品在建库时使用bisulfite处理后,非甲基化的C转化为U,后期PCR后进一步转化为T,因此甲基化项目CG含量偏低是正常的。

    • 2.为什么 RRBS 主要应用于人、鼠、猪等高等哺乳动物?

        RRBS 用 MspI 酶切将 CpG 位点富集出来进行测序,该酶的酶切位点为 CˇCGG,而不适用于CHG与CHH序列环境的检测。 高等哺乳动物中 DNA 甲基化主要发生在5’-CpG-3’二核苷酸的胞嘧啶上,植物中许多物种的甲基化信息位于CHG与CHH序列环境。

    拓展材料

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